你的细胞又不舒服了?!这次可能是细胞老化了......

细胞生物学专家 2019年9月5日

常有用户提到细胞状态不好,
比如细胞不再透亮,
内部很多细碎的小黑点,
细胞形态不规则,
培养液变黄
.......
你的细胞又不舒服了,
我们建议
除了考虑血清和细菌污染的问题,
也不要忽视细胞老化

1 细胞老化有哪些表现?
1.细胞老化最开始的现象通常为细胞内部会出现空泡(可能是凋亡小体),也可能会出现黑点,大多沿细胞周边排布,内部中间也可能会显现一些,但相对周边为少。
2.老化以后的细胞会出现立体感慢慢消失,开始成扁平状,细胞与细胞之间的间隔减小或混在一起,细胞不再是梭形,而会成为各种不规则形状。
3.细胞折光性变差,镜下可见细胞“变薄”,做转染实验时,细胞死亡率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象,仍清亮。(但如果是细菌污染的话,一般会出现培养液的迅速变黄,混浊,镜下可见大量繁殖的细菌;若是支原体污染的话,细胞也会失去正常形态,会有细胞的死亡)。
4.细胞的贴壁性减弱,开始有细胞漂浮于培养液中。
5.老化的细胞,表面分泌物会增多,细胞表面的纯净度越来越低。
6.分裂的细胞数量明显的减少同时细胞的增殖速度也会大大下降。
7.细胞开始长角分化。

                  图1 HEK293细胞                              图2  MSC细胞
图1  实心箭头指示的是发生细胞老化的HEK293细胞,SA-β-gal染色阳性,而空心箭头指的是未发生老化的细胞。
图2  被染上蓝色的是发生老化的MSC细胞, 未被染色的是未发生老化的细胞。
由图片可以看出老化细胞体积增大、细胞扁平。

2 细胞老化,可能有这些原因?
1.在体外传代次数太多或太久
2.培养液营养不够
3.接种密度不当
4.培养液pH偏离

3 如何预防细胞老化?
1. 防止细胞老化最主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种,特别是传代,不能等细胞太密了之后传,一般细胞建议长到70%融合度传代最好。
2. 换培养液应该根据自己细胞消耗培养基的情况来确定是否该换。如果感觉时间不好把握的话就多培养几瓶细胞,在不同的时间换液,最后再来比较下,看什么时候换液好,得出自己的结论。
3. 选择正确的血清与培养基:细胞对血清特别敏感,直接影响细胞的生长。一定要选择适合的血清不然就会因营养物质不协调而导致细胞老化。
4. 在间充质干细胞培养时必然要进行消化,但是消化对细胞的表面蛋白质有很强的破坏作用,因此不能长时间进行消化并且在选择消化酶时也要选择较为合适pH和浓度,不然就会使细胞老化或者分化。
5. 在开始养细胞传代时,也要特别注意冻存细胞,以保持细胞有种子存在,可以有效避免细胞损伤。

此外,老化后的细胞很难再重新年轻化,重新复苏吧!


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